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ディープシーケンシングによる細胞株の認証

による再現性の高い研究結果を取得するための、ディープシーケンシングベースのQCサービス

現在使用している細胞株や生物学的モデルに、本当に満足されていますか? 複数の研究によると、一般的な細胞株の1/5~1/3は、種内や種が異なる細胞、あるいはマイコプラズマやウイルスがコンタミしていると言われています。International Cell Line Authentication Committee (ICLAC) は、530以上(2021年6月現在)の細胞株において、認証されたストックが存在せず誤認されたまま使用されていると文書で説明をしています。

当社の ディープシーケンシングベース細胞株認証サービスの利用によって、モデルの信頼性と高品質データの再現性を確保します。この対象となるパネルは、細胞株、オルガノイド、異種移植モデルおよび患者組織を含む、マウスとヒトのサンプルを正確に特徴付けるために、600以上のSNPおよび染色体セグメントの解析を含んでいます。また、1,200以上のヒトがん細胞株と30のマウス細胞株など、最も一般的に使用されているがん研究モデルについて、当社独自のDNAフィンガープリントを作成しました。

従来のPCRベースのSTRアッセイは、ベンダーにもよりますが、9から24のSTRサイトのみがターゲットとされています。PCRによるSTRアッセイでは、固有の遺伝子マーカーを欠く特定の近交系動物系統に由来するマウス細胞株、あるいは同一のヒトドナーに由来する様々な腫瘍細胞の認証といった、遺伝学的に近い関係にある細胞間において、その制度が低くなる可能性があります。さらに、ミスマッチ修復(MMR)遺伝子に突然変異を有する生体サンプルでは、マイクロサテライト不安定性およびhypermutator (多くの遺伝子変異によりがん化などが誘導された状態)を示すことが知られています。その結果、想定外の遺伝的な変化、細胞のコンタミネーションの増大、およびSTRの誤分類をもたらす可能性があります。

ディープシーケンシングによる細胞株の認証

従来のPCRベースのSTR/SNPアッセイより優れている点
  • 正確性の向上
  • 薬剤感受性の向上
  • 高いスループット性
  • 豊富な情報
  • サンプル当たりのコスト低減
  • 迅速なターンアラウンド


ディープシーケンシングベースのQCパネルによって、3つのレベルでサンプル認証を実現します。

3つのレベルでのモデル認証

お客様の声より

「弊社は過去に細胞株認証のためにSTRアッセイを使用しましたが、その時の技術では感度が低く、マウス細胞のコンタミネーションを検出することはできませんでした。他のサービスとは異なり、Crown Bioscienceの細胞株認証サービスは、高レベルの感度と正確性を有し、種間やその他の細胞のコンタミネーションや汚染を検出できるため、我々の重要な研究を継続することができます。」
Hongchun Liu教授、
中国科学院上海薬物研究所

細胞株認証 (CLA)
アッセイ比較
ディープシーケンシングを用いたCLA PCRベースのSTRアッセイを用いたCLA
技術 バーコードディープシーケンシング


マルチプレックスPCR
& キャピラリー電気泳動

リードアウト デジタル
(クリーンで、ほとんど定量化誤差なし)
アナログ
(ノイズが多く、定量化誤差が高い)
ヒト細胞認証 可能 可能
マウス細胞認証 可能 制限付き
MMR欠損細胞株の同定 可能 不可
コンタミネーション検出感度 高 (1%) 低〜中 (5-20%)
正確性 低〜中
スループット性
汚染物質の同定 可能 不可
汚染率の定量化 可能 不可
大型バイオバンクへの適用 可能 不可
種間コンタミネーションの検出 可能 制限付き
種内コンタミネーションの検出 可能 制限付き
参照なしでのコンタミネーションの検出 可能 不可
3種以上の細胞株の混合比の推定 可能 (1% sensitivity) 不可

認証可能なヒトおよびマウス細胞株の一覧
NAR Genomics and Bioinformatics, Volume 2, Issue 3, September 2020, lqaa060 [KM1]  

認証のためのサンプル要件および提出

 
サンプルの種類 出荷条件
DNA 粉末 100-500ug 室温 (RT)
液体 氷中
細胞ペレット 100万個以上の細胞

ドライアイス

新鮮がん組織 瞬間凍結 200 mg以上または100万個以上の細胞 ドライアイス
ホルマリン固定 RTの場合、72時間以内の送付
FFPE組織 非染色組織切片(およびH&E染色後の隣接切片) RT

詳細なサンプル調製および収集ガイドはこちら

よくある質問

 

どのような細胞やモデルの場合に、STRよりもSNPによってより特徴づけられるべきでしょうか?

SNPは、以下のような細胞の場合に特に有用です。

  • ミスマッチ修復/マイクロサテライト不安定性に欠陥がある
  • 近交系に由来する複数の細胞間
  • 染色体コピー数異常を伴う

ターンアラウンドタイムはどれくらいですか?

7~11営業日

性別はどのように決定するか。

ヒト性別はY染色体上にある3つのSNPによって推測されています。いくつかのがんのゲノムではY染色体が失われており、「Female」と判定された場合でも、その結果が正確ではない場合があります。

どのような人種を判定できますか?

当社のパネルは、漢民族(CHB)、ナイジェリアヨルバ族(YRI)、および北および西ヨーロッパ祖先を有するユタ居住者(CEU)の3つの参照集団を分類することができます。人種は、全SNPの>70%が1つの集団を支持する場合に予測することができます。

どのような場合に「一致」と見なされますか。

90%を超える類似度があると、一致と見なされます。

サマリーレポートはどのようなものですか?

サンプルレポートのダウンロードはこちらから

 

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